Hologic Fetal Fibronectin (fFn)
Pek çok hamile kadında erken doğum göstergesi olabilecek belirtiler görülebilir. Bu belirtiler rahim kasılmaları, vajinal akıntıda değişiklikler, bel ağrısı, kasıkta baskı hissi, kramp ve rahim ağzı açıklığıdır. Buna karşın, belirtilerin görüldüğü kadınların hepsi de erken doğuma gitmeyecektir. Çoğunlukla doğum miyadında gerçekleşir. Erken doğumlar başarılı sonuçlansa da ne yazık ki bebek erken doğduğu için ciddi komplikasyonların gelişebilir. 37 haftalıktan küçük bebekler sıklıkla solunum ve beslenme zorluğu yaşarlar. Akciğerleri ve diğer organları yeterince gelişmemiştir ve normal işlevlerini göremezler. Bu zorlanma da kalıcı sağlık problemleri yaratabilir. Bebek ne kadar erken doğmuşsa komplikasyon gelişme ihtimali de o oranda artar.
Doktor erken doğum olabileceğini düşünürse doğumu geciktirmek amacıyla uygulanan tedavileri gözden geçirecektir. Bu tedavilerin istenmeyen yan etkileri olabilir. Bundan dolayı erken doğum riski olup olmadığını bilmek, yapılacak uygulamalarda doktora karar vermesi açısından yardımcı olur. fFN yakında doğum yapacak olanlarla yakın zamanda doğum yapmayacak olanların ayırımı açısından doktora yardımcı olan bir testtir.
Fetal fibronektin testi hamileliğin 22. haftası ile 35. gestasyonel haftası arasında, erken doğum belirtileri olan hamile kadınlarda kullanılır. Test erken doğum olasılığını önceden belirlemede önemli ölçüde yardımcı olmaktadır.
Fetal Fibronektin (fFN) testi, 22. ve 35. gebelik haftaları arasındaki gebe kadınlarda, erken doğum olasılığını gösteren bir veya daha fazla belirti bulunduğu durumlarda istenir.
Hologic QuikCheck™ fFN, servikovajinal salgılardaki fetal fi bronektinin tespitinde kullanılan kalitatif bir testtir.
Sadece Profesyonel Kullanım İçindir.
Hologic QuikCheck fFN testi, servikovajinal salgılardaki fetal fi bronektinin kalitatif tespiti için kullanılır. Gebeliğin 22. hafta, 0. günü ile 34. hafta, 6. günü arasında servikovajinal salgılardaki fetal fi bronektin varlığı, yüksek erken doğum riski ile ilişkilendirilmiştir.
QuikCheck fFN, katı fazlı bir immün-altın (immunogold) assaydir. Posterior forniksten alınan numuneler bir ekstraksiyon tamponuna yerleştirilir. İmmobilize monoklonal fare anti-fetal fi bronektin antikoru, insan fi bronektini ve keçi poliklonal anti-fi bronektin antikoru-altın konjugatı içeren bir test şeridi ekstraksiyon tamponuna yerleştirilir. Ekstraksiyon tamponu test şeridinde emilim hareketiyle yukarı doğru ilerler; poliklonal antikor-kolloidal altın konjugatı tekrar süspanse olur ve ekstraksiyon tamponuyla birlikte şeritte ilerler. Numunede fetal fi bronektin varsa, antiinsan fi bronektin kolloidal altın konjugatına bağlanır. Bu kompleks, fetal fi bronektine özgü immobilize monoklonal antikor içeren bir membran üzerinde kapiler hareket ile ilerler. Fetal fi bronektin-antifi bronektin-altın kompleksi daha sonra immobilize anti-fetal fi bronektin antikoruna bağlanır ve görünür bir hat meydana getirir. Örnekte fetal fi bronektin bulunmuyorsa, immobilize anti-fetal fi bronektin antikoru ile hiçbir bağ oluşmaz. Rezidüel bağlanmamış anti-insan fi bronektin poliklonal antikoru-altın konjugatı membranda ilerler ve immobilize plazma fi bronektine bağlanarak assay kontrolü sağlar. İki görünür hat oluşması numunenin pozitif olduğunu, tek bir görünür hat oluşması ise numunenin negatif
olduğunu belirtir.
Tüm bileşenler 2° ile 25°C arasında stabildir ve etiketlerde basılı son kullanma tarihlerine kadar kullanılabilir. Dondurmayın.
American College of Obstetricians and Gynecologists (Amerikan Kadın Hastalıkları ve Doğum Uzmanları Koleji) tarafından gebeliğin 37. haftasından önce gerçekleşen doğum olarak tanımlanan erken doğum, non-kromozomal perinatal morbidite ve mortalite vakalarının çoğundan sorumludur (1-4). Erken doğum tehdidi semptomları arasında uterin kontraksiyonlar, vajinal akıntı değişimi, vajinal kanama, bel ağrısı, abdominal rahatsızlık, pelvik baskı ve kramp yer alır. Servikal boyutların belirlenmesine olanak sağlayan uterin aktivite monitorizasyonu ve dijital servikal muayeneyi içeren erken doğum tehdidinin saptanmasına yönelik tanı amaçlı modalitelerdir.
Minimal servikal dilatasyonun (< 3 santimetre) ve uteral aktivitenin normal olduğu vakalarda bu yöntemlerin sınırlı kaldığı ve erken doğum riskini kesin şekilde tespit edemediği gösterilmiştir (5,11,13). Çeşitli serum biyokimyasal belirteçlerin değerlendirilmesine rağmen, bunlardan hiçbiri klinik pratik kullanım için genel kabul görmemiştir (6,7,20). Bir fi bronektin izoformu olan fetal fi bronektin (fFN), moleküler ağırlığı yaklaşık 500.000 dalton olan karmaşık bir adeziv glikoproteindir (8,9). Matsuura ve meslektaşları, özel olarak III-CS’yi (fi bronektin fetal izoformunu tanımlayan bölge) tanıyan FDC-6 adlı bir monoklonal antikoru
tanımlamışlardır (8,9). Plasentalar üzerinde yapılan immünohistokimyasal çalışmalarda, fFN’nin uterus içindeki maternal ve fetal ünitelerin kesişme yerini tanımlayan bölgenin hücre dışı matriksi ile sınırlandığı gösterilmiştir (5,10). Gebelik süresince kadınların servikovajinal salgılarında bulunan fetal fi bronektin, monoklonal antikor tabanlı bir immünoassay kullanımıyla tespit edilebilir. Servikovajinal salgılardaki fetal fi bronektin gebeliğin erken döneminde artış gösterir, ancak normal gebeliklerde 22. ila 35. haftalarda azalır. Gebeliğin ilk haftalarında vajinadaki fetal fi bronektin varlığının önemi henüz anlaşılamamıştır. Bununla birlikte, bu durum ekstravillöz trofoblast popülasyonunun ve plasentanın normal gelişmesini yansıtıyor olabilir. Semptomatik gebe kadınlarda gebeliğin 22. hafta, 0. gün ile 34. hafta, 6. gün arasında (5,11–15) ve asemptomatik gebe kadınlarda 22. hafta, 0. gün ile 30. hafta, 6. gün arasında (16-19) servikovajinal salgılarda fFN varlığının tespit edilmesi, erken doğum ile ilişkilendirilmiştir.
- Sadece in vitro tanı amaçlı kullanım içindir.
- Bu testi gerçekleştirmeden önce talimat kılavuzunun tamamını okuyun ve talimatları dikkatlice izleyin. Bu kılavuzda açıklanan assay protokolünde değişiklik yapılması hatalı sonuçlara neden olabilir.
- Farklı lotlara ait materyalleri karıştırmayın.
- Numune toplama işlemi için yalnızca QuikCheck kitinde bulunan aplikatörü ve ekstraksiyon tamponunu kullanın.
- Farklı fFN test kitlerine ait bileşenler QuikCheck ile kullanılamaz.
- Aplikatör ambalajının bütünlüğü bozulmuşsa veya ekstraksiyon tamponu tüpünde sızıntı varsa kullanmayın.
- Son kullanma tarihi geçmiş materyalleri kullanmayın.
- İnsan kaynaklı numuneler potansiyel olarak enfeksiyöz kabul edilmelidir. Kullanılmış kit içeriklerinin ve numunelerin toplanması, elleçlenmesi, saklanması ve atılması işlemlerinde gerekli önlemleri alın. Kullanılmış materyalleri uygun bir biyolojik atık kutusuna atın.
- Ekstraksiyon tamponu %0,02 sodyum azit içerir, bu madde kurşun veya bakırla etkileşime girerek potansiyel olarak patlayıcı metal azitler oluşturabilir. Bu reaktifi atarken, azit birikmesini önlemek için her zaman boruları bolca su akıtarak temizleyin.
- Materyalleri dikkatli şekilde taşıyın, materyalleri eğmeyin veya sıkıştırmayın.
- QuikCheck fFN testi 15 dakikalık örnekleme süresinde gerçekleştirilmelidir. Örnekler daha sonra test edilmek üzere saklanamaz.
- Servikovajinal sıvının kayganlaştırıcılar, sabun, dezenfektanlar veya kremler gibi topikal ajanlarla (örn. K-Y® Jel kayganlaştırıcı, Betadine® dezenfektan, Monistat® krem, heksaklorofen) kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Bu maddele QuikCheck fFN testinin numune toplama işlemini ve/veya antikor/antijen reaksiyonunu etkileyebilir.
- Ekstraksiyon tamponu tüpü, assay prosedürü sırasında dik konumda tutulmalıdır.
Sağlanan Reaktifler ve Materyaller
1. Steril Aplikatör: Bir adet plastik mil üzerinde bulunan steril polyester uçlu aplikatör.
2. Test Şeridi: İmmobilize monoklonal fare anti-fetal fi bronektin antikoru, insan fi bronektini ve keçi poliklonal anti-fi bronektin antikoru-altın konjugatı içeren membranlar.
3. Ekstraksiyon Tamponu İçeren Tüp: Bir adet 1 ml ekstraksiyon tamponu içeren polipropilen tüp.
Gerekli olan fakat Sağlanmayan Materyaller
1. Ekstraksiyon tamponu tüpünü yerleştirmek için test tüpü rafı
2. Zamanlayıcı
Her ambalaj, numune toplama için kullanılan steril polyester uçlu bir aplikatör içerir. Bu ürün, bu assayle birlikte kullanılabilen tek uygun
aplikatördür. Diğer aplikatörlerde bulunan materyaller assayi etkileyebilir. Servikovajinal salgılar vajen posterior forniksten alınır. Numune toplama işleminin nazik şekilde yapılması amaçlanmıştır. Zorlayarak veya kuvvet uygulayarak numune toplama mikrobiyolojik kültürlerde yaygın olsa da bu işlem için gerekli değildir. Spekulum muayenesi esnasında, serviksi veya vajinal kanalı incelemeden ya da manipüle etmeden önce, servikovajinal sıvıları emmek üzere aplikatör ucunu yaklaşık 10 saniye süreyle vajen posterior forniks boyunca hafi fçe çevirin. Aplikatör ucunu satüre etmek için daha sonra yapılacak denemeler testi geçersiz kılabilir. Aplikatörü çıkarın ve aşağıdaki talimatları uygulayarak testi hemen gerçekleştirin. Sadece QuikCheck kitinde bulunan ekstraksiyon tamponunu kullanın. Örnekler daha sonra test edilmek üzere saklanmamalıdır.
1. Hasta örneğini toplamadan önce, ekstraksiyon tamponunu içeren tüpü ambalajdan çıkarın ve kapağı dikkatlice açın.
2. Sağlanan steril polyester uçlu aplikatörü kullanarak, hasta örneğini yukarıda açıklanan şekilde toplayın. Aplikatörü çıkarın, ekstraksiyon tamponunu içeren tüpün içine aplikatör ucunu sokun ve 10-15 saniye boyunca güçlü bir şekilde karıştırın.
3. Ucu tüpün iç yüzeyine yaslayıp çevirerek aplikatörden mümkün olduğunca fazla sıvı giderin. Potansiyel biyolojik tehlikeli materyallerin
elleçlenmesi prosedürüne uygun şekilde aplikatörü atın.
4. Test şeridinin yalnız etiketli bölümünü tuttuğunuzdan emin olarak, şeridi folyo torbadan çıkarın. Test şeridinin alt ucunu (oklarla belirtilen daldırma alanı) ekstraksiyon tamponunu içeren tüpe sokun. Test şeridini sokarken daldırma alanını geçmeyin. Test şeridinin inkübasyonu sırasında tüp kapağını takmayın.
5. Test şeridini 10 dakika süreyle ekstraksiyon tamponu içinde bırakın. Ardından test şeridini derhal çıkarın ve sonucu okuyun.
6. Potansiyel biyolojik tehlikeli materyallerin elleçlenmesi prosedürüne uygun şekilde kullanılmış test şeridini, ekstraksiyon tamponu tüpünü ve ekstraksiyon tamponunu atın.
Sonuçların Yorumlanması
QuikCheck fFN kalitatif bir testtir.
Fetal fi bronektinin yokluğunu gösteren negatif sonuç, tek bir hat şeklinde görünür. Fetal fibronektinin varlığını gösteren pozitif sonuç, iki hat şeklinde görünür. Hatlar çok silik çizgilerden çok koyu çizgilere kadar değişiklik gösterebilir. Hiçbir hat görünmezse veya kontrol hattı görünmezse, testin tekrar edilmesi gerekir.
Beklenen Değerler
Semptomatik kadınlarda 24. hafta, 0. gün ile 34. hafta, 6. gün arasında görülen yüksek fFN seviyeleri (≥ 0,050 μg/ml) (1 x 10-7 mmol/l) örneğin toplanmasını takip eden ≤ 7 veya ≤ 14 gün içinde yüksek doğum riskini belirtir (5,11-15). Asemptomatik kadınlarda 22. hafta, 0. gün ile 30. hafta, 6. gün arasında görülen yüksek fFN seviyeleri gebeliğin ≤ 34. hafta, 6. günü içinde yüksek doğum riskini belirtir (16-19). fFN için 0,050 μg/ml kesme değeri, gebelik sırasındaki fetal fi bronektin ifadesinin erken doğum ile ilişkisini değerlendirmek için yapılan çok merkezli bir çalışmada belirlenmiştir (5). 0,050 μg/ml kesme değeri, safl aştırılmış fFN ve ε=1,28 değerindeki A280 ölçümü kullanılarak standartlaştırılmıştır (21).
Test Sınırlamaları
1. Bu assay yalnızca servikovajinal salgılardaki fetal fi bronektinin kalitatif tespitiiçin kullanılabilir.
2. Test sonuçları her zaman için hasta yönetimine ilişkin diğer klinik verilerle ve laboratuvar verileriyle birlikte kullanılmalıdır.
3. Numuneler, serviksin dijital muayenesinden veya manipülasyonundan önce alınmalıdır. Servikal manipülasyonlar yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir.
4. Yanlış pozitif sonuçları önlemek için hasta son 24 saat içinde cinsel ilişkiye girdiyse numune toplanmamalıdır.
5. Abruptio plasenta, plasenta previa veya orta ila yoğun vajinal kanama varlığı bilinen ya da şüphe edilen hastalarda test uygulanmamalıdır.
6. Serklaj vakası bulunan hastalarda test uygulanmamalıdır.
7. QuikCheck fFN testinin performans özellikleri, tekil gebelik geçiren kadınlarda yapılan çalışmalara göre belirlenmiştir. Testin performansı çoğul gebelik (örn. ikiz) geçiren kadınlarda doğrulanmamıştır.
8. Amniyotik membranlarda ruptür varlığında QuikCheck fFN testi gerçekleştirilmemelidir, testin uygulanmasından önce amniyotik
membranlarda ruptür varlığı ekarte edilmelidir.
Performans Özellikleri
Yayımlanan Klinik Çalışmalar
• García Alonso LA, et al. Presence of fetal fi bronectin (fFN) in cervico-vaginal secretion as predictor of premature labor Ginecol Obstet Mex 2002;70:379. Gebeliğin 34. haftasından önce görülen fFN varlığı; semptomatik bir popülasyonda 8,37’lik göreli riskle ve %75 hassasiyet, %41 özgüllük, %82 pozitif kestirim değeri ve %95 negatif kestirim değeri ile erken doğumu öngörür.
• Coleman, Mathew AG, et al. Fetal fi bronectin detection in preterm labor: evaluation of a prototype bedside dipstick technique and cervical assessment. Am J Obstet Gynecol 1998;179(6):1553. Fetal fi bronektin tespiti; %65 hassasiyet, %85 özgüllük, %41 pozitif kestirim değeri ve %94 negatif kestirim değeri ile 10 gün içinde gerçekleşecek doğumu öngörmüştür.
• García Alonso LA, et al. Economical impact of preterm delivery management based on fetal fi bronectin results. Ginecol Obstet Mex. 2004 72:385-93. Erken doğum eylemi tanısında fFN tespitini kullanarak, fFN negatif olan hastalar için gereksiz tedavileri ve hastane yatışlarını ortadan kaldırdık ve 6 aylık bir dönemde 4.620.000 pesoluk tasarruf sağladık.
Laboratuvar Performansı
Çalışmalar Arası Tekrarlanabilirlik
Üç fFN test şeridi lotu ile (her lot 40 test içerir) 12 pozitif örnekte çift olarak, 6 negatif örnekte çift olarak ve 2 sınır (borderline) örnekte çift olarak çalışılan testler sonucunda, lotlar arasında %100 uyum görülmüştür.
Etkileşen Maddeler
Aplikatörün veya servikovajinal sıvıların kayganlaştırıcılar, sabunlar, dezenfektanlar veya kremler ile kontamine olmamasına dikkat edilmelidir. Kayganlaştırıcılar veya kremler numunenin aplikatör tarafından emilmesini fi ziksel olarak etkileyebilir. Sabunlar veya dezenfektanlar antikorantijen reaksiyonunu etkileyebilir.
Potansiyel olarak etkileşime girebilen maddeler, servikovajinal salgılarda bulunabilecek konsantrasyonlarda test edilmiştir. Aşağıdaki maddeler belirtilen seviyelerde test edildiklerinde assay ile etkileşime girmemiştir.
